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    Calcein釋放實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞活性實(shí)驗(yàn)方法

    發(fā)布時(shí)間: 2021-11-12  點(diǎn)擊次數(shù): 1478次
    實(shí)驗(yàn)步驟


    1. 靶細(xì)胞的標(biāo)記 
    用5μmol/L Calcein AM 37℃ 水浴30min進(jìn)行標(biāo)記。
     
    2. 效-靶細(xì)胞作用 
    殺傷實(shí)驗(yàn)在圓底96孔培養(yǎng)板中進(jìn)行。按E/T比例:50/1、25/1、12.5/1、6.25/1、3.13/1、1.56/1加入梯度稀釋的效應(yīng)細(xì)胞與標(biāo)記好的靶細(xì)胞各l00μl/孔,每個(gè)比例3復(fù)孔。同時(shí)設(shè)自發(fā)釋放組3復(fù)孔,*釋放組3復(fù)孔。效-靶細(xì)胞作用96孔培養(yǎng)板在37℃ 5% CO2培養(yǎng)箱孵育4h后,3000r/min離心5min,將上清移入新的孔中。
     
    3. 熒光檢測(cè) 
    用熒光測(cè)量?jī)x檢測(cè)上清的熒光值(FI),激發(fā)光為485nm,發(fā)射光為538nm。
     
    4. 結(jié)果計(jì)算
    殺傷率(%)=■×100%



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